抗原多肽选择的基本原则有(1)尽可能是在蛋白表面;(2)保证该段序列不形成α-helix;
(3)N,C端的肽段比中间的肽段更好;(4)避免蛋白内部重复或接近重复段的序列;(5)避免同源性太强的肽段;(6)交联可以交联在N、C两端,选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端;(7)序列中不能有太多的Pro,但有一两个Pro有好处,可以使肽链结构相对稳定一些,对产生特异性抗体有益。
为了使生产抗体获得最佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有必要的,设计应满足一个基本条件:在免疫过程中,该抗原既不会产生过强的免疫反应,同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。
为了避免识别区域隐藏在蛋白内部的风险,我们通常建议选择蛋白的N,C两端来产生的相应的抗体。因为在完整的蛋白中,N,C两端通常是暴露在蛋白表面的。然而,一定要注意膜蛋白的C端疏水性太强,不适合作为抗原。
优质抗体是一种具有适当灵敏度和特异性的抗体,能够回答您的检测提出的问题。此外,一种抗体不一定适用于所有应用,因为每种应用都有不同的性能规格。
将载体蛋白加在远离抗体识别区域的一端,在序列中没有Cys的情况下在N或C端加上Cys为交联的首选方法。
多克隆抗体和单克隆抗体都有各自的优势。一般来说,单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高。与单克隆抗体相比,大量多克隆抗体的生产相对快速且成本低廉,它们是非特异性的,因为它们能够识别任何一种抗原上的多个表位。
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